Veregruppide määramine tsikloonide abil

Veregrupi määramine tsoolikloonide abil on lihtne protseduur, mis viiakse läbi laboris. See põhineb monoklonaalsete seerumite ja aglutinogeenide keemilisel reaktsioonil. Selle tulemusena on võimalik teada saada mitte ainult veregruppi, vaid ka selle Rh-faktorit ja neid meetodeid peetakse kõige lihtsamateks, täpsemateks ja taskukohasemateks. Aineid müüakse mugavas ja erineva suurusega pudelites ning need on varustatud tilguti dosaatoriga. Analüüs võtab minuteid, nii et laborid saavad kogu päeva jooksul töödelda tohutul hulgal proove.

Mis on tsoolikloonid?

Zolikoonid on soolalahuses leiduvad monoklonaalsed antikehad. Aine sai oma nime leiutajate auks - Lenini Keskordu Instituut, mis tänapäeval nimetati ümber Hematoloogiliste Uuringute Keskuseks. Neid esindab vedelik, mida müüakse 5 ja 10 ml pudelites. See on universaalne hematoloogiliste uuringute reaktiiv, kuna see võimaldab teil määrata veregrupi nii süsteemis AB0 kui ka Rh-süsteemis..

Tsolikloone on 3 peamist tüüpi:

  • anti-A - punane vedelik;
  • anti-B - sinine aine;
  • anti-D - läbipaistev reaktiiv Rh-faktori määramiseks.

Veregrupi määramiseks kasutatakse anti-A ja B-vastaseid tsooliklooni. Nad alustavad biokeemilisi reaktsioone aglutinogeenidega, mis paiknevad erütrotsüütide - punaste vereliblede - pinnal. A-veregrupi erütrotsüüdid sisaldavad aglutinogeeni A, mis reageerib anti-A tsooliklooniga. Agglutüleen B sisaldus määratakse sarnaselt. Reaktsiooni positiivne tulemus on erütrotsüütide adhesioon ja nende sadestumine.

Vere määramise protseduur

Tsüklonite abil veregrupi määramise protseduur on väga lihtne ja viiakse läbi mõne minutiga. Selleks on vaja kohalikku ("elusat") kapillaarverd, lubatud on säilitusaine olemasolu. Teil on vaja ka tabletti - lamedat klaaspinda, millel reaktsioon toimub. Protseduur viiakse läbi vastavalt konkreetsele algoritmile:

  1. tilgutage plaadi pinnale kaks suurt tilka tsikloone (tavaliselt anti-A reaktiiv on vasakul ja anti-B reaktiiv paremal);
  2. lisage väikesed veretilgad, mille maht on 10 korda väiksem kui reagentidel;
  3. liigutage tabletti ettevaatlikult, nii et veri seguneb lahusega, kuid kaks tilka ei ühenda üksteisega;
  4. jälgige tulemusi mõne minuti jooksul.

Rühma loomiseks sobib ka veri koos säilitusaine lisamisega. Kuid tehnika lihtsus võimaldab seda kohapeal läbi viia kohe pärast bioloogilise materjali võtmist. Piisab, kui tõmmata sõrmest väike kogus kapillaarvere, nii et see on analüüsimiseks täielikult piisav.

Tulemuste dekodeerimine

Tulemusi saab jälgida mõni minut pärast reagentide ühendamist. Vedelike täielik segamine viitab reaktsiooni puudumisele ja aglutinatsioon avaldub punaste hüübimiste ilmnemisel läbipaistvas lahuses. Need on punased verelibled, mis kokkusobimatute monoklonaalsete antikehadega kokku puutudes kleepuvad kokku. Seejärel saate tulemused dešifreerida lihtsa algoritmi abil:

  • 1. rühm (0) - aglutinatsioon puudub mõlemas tilgas, kuna erütrotsüütidel pole aglutinogeene;
  • Rühm 2 (A) - reaktsiooni täheldatakse esimeses tilgas anti-A tsoliklooniga;
  • Rühm 3 (B) - teises tilgas kleepuvad erütrotsüüdid kokku kokkupuutel anti-B reaktiiviga;
  • 4. rühm (AB) - punase sade ilmumine mõlemas tilgas.

Neljandat veregruppi peetakse kõige haruldasemaks, seega kui aglutinatsioon ilmub mõlemasse auku, korratakse analüüsi. Lisaks tuleb tavalisele soolalahusele lisada verd, et välistada ohtlike haiguste tekkimise võimalus. Tervel inimesel ei reageeri see soolalahusega mingil viisil ja erütrotsüüdid ei kleepu kokku.

Rh-teguri määramine

Rh-faktori määramiseks vajate anti-D. tsoliclonit. See on värvitu vedelik ja seda müüakse ka väikestes pudelites koos dosaatoriga. Reaktsiooni läbiviimiseks piisab veel ühest veretilgast, mis asetatakse plaadile eraldi. Protseduur viiakse läbi vastavalt järgmisele skeemile:

  1. tilgutada klaasile 0,1 ml tilka anti-D tsolicloni;
  2. kõrval lisada tilk verd, mille maht on 0,01 ml;
  3. ühendage kaks vedelikku klaaspulgaga ja segage klaasi ettevaatlikult, nii et veri seguneks reagendiga;
  4. fikseerige tulemus 3 minuti pärast.

Esimesed tulemused on näha 15 sekundi pärast, kuid lõpptulemuse kindlakstegemiseks on oluline oodata 3 minutit. Tulemuse olemasolu, see tähendab aglutinatsioonireaktsiooni ilmnemine näitab, et Rh-faktor on positiivne, selle puudumine näitab negatiivset Rh-i.

Kasulikud näpunäited

Veregrupi ja Rh-faktori määramist tsüklonite abil peetakse üheks lihtsamaks ja kättesaadavamaks meetodiks, seetõttu kasutatakse seda laialdaselt erineva tasemega laborites. Pealegi annab see analüüs usaldusväärseid tulemusi. Mõnel juhul on need siiski valed ja selle põhjuseks on mitmete reeglite eiramine. Tsikloonide kasutamise ja nendega töötamise lihtsad juhised võimaldavad teil vältida ebausaldusväärsete tulemuste saamist ja vajadust uuring uuesti läbi viia:

  • hoidke reaktiive külmkapis temperatuuril 2 kuni 8 kraadi ja kasutage avatud pudelit 30 päeva jooksul;
  • uuringud viiakse läbi toatemperatuuril ja liiga kuumas ruumis on soovitatav perioodiliselt jahutada tableti klaaspinda;
  • märkige tabletile erinevad tsikloonid markeriga, kuna nende värv kaob pärast vere lisamist kiiresti;
  • jälgige reagentide õigeid proportsioone: kui verd on liiga palju, väljendub erütrotsüütide aglutinatsioonireaktsioon vähe;
  • ärge lubage vedelate tilkade segamist, milles juba on olemas erinevat tüüpi tsolkikloonid - sel juhul tuleb reaktsiooni korrata;
  • märkida lõpptulemus vähemalt 3 minutit pärast reaktsiooni algust.

Samuti on analüüsi käigus oluline jälgida toimingute järjekorda. Niisiis, kui klaasi pind ei kõigu, isegi kui adhesioonireaktsiooni ei toimu, paiknevad erütrotsüüdid tilga servavööndis. See võib viia tulemuste valesti tõlgendamiseni. Veregrupi määramisel on vaja arvestada patsiendil täheldatud ägedate ja krooniliste haigustega. Hematopoeetilise süsteemi maksa ja elundite patoloogiate, samuti sepsisena kulgevate haiguste korral võib tekkida pataglutinatsioon. Punased verelibled jäävad kokku ka siis, kui nad puutuvad kokku normaalse soolalahusega. Seevastu leukeemia korral ei reageeri vererakud antikehade olemasolule ja aglutinatsiooni ei toimu..

Tsüklonid on olulised reaktiivid, mida kasutatakse hematoloogia laborites iga päev. Need võimaldavad teil kiiresti ja täpselt määrata veregrupi ja selle Rh ilma lisavarustuse ja erioskusteta. Siiski on oluline järgida lihtsat algoritmi, et analüüsi tulemused oleksid tõeliselt usaldusväärsed..

MedGlav.com

Haiguste meditsiiniline kataloog

Veregrupid. Veregrupi ja Rh-faktori määramine.

VERERÜHMAD.


Paljud uuringud on näidanud, et veri võib sisaldada erinevaid valke (aglutinogeenid ja aglutiniinid), mille kombinatsioon (olemasolu või puudumine) moodustab neli veregruppi.
Igale rühmale antakse sümbol: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).
On kindlaks tehtud, et vereülekandeid saab teha ainult samast rühmast. Erandjuhtudel, kui ühe rühma veri puudub ja vereülekanne on eluliselt tähtis, on lubatud teise rühma vereülekanne. Nendes tingimustes võib rühma 0 (I) verd üle kanda mis tahes veregrupiga patsientidele ja AB (IV) verega patsiente võib üle kanda mis tahes rühma doonoriverega.

Seetõttu on enne vereülekande alustamist vaja täpselt kindlaks määrata patsiendi veregrupp ja ülekantud veregrupp..

Veregrupi määramine.


Veregrupi määramiseks kasutatakse 0 (I), A (II), B (III) rühma standardseerumeid, mis on spetsiaalselt ette valmistatud vereülekandejaamade laborites..
Pange 3-4 cm kaugusel valgele plaadile vasakult paremale numbrid I, II, III, mis tähistavad standardseerumeid. Tilk standardset seerumi 0 (I) rühma kantakse pipetiga plaadi sektorisse, mis on tähistatud numbriga I; seejärel kantakse teise pipetiga tilk seerumi A (II) rühma numbri II all; võtke ka rühma seerum B (III) ja kandke kolmanda pipetiga numbri III all.

Seejärel torgitakse katsealust sõrmega ja voolav veri viiakse klaaspulgaga plaadil olevasse seerumitilku ja segatakse, kuni see on ühtlaselt määrdunud. Igale seerumile kantakse uus pulk. 5 minuti pärast värvimise hetkest (tunni kaupa!) Määratakse veregrupp segu muutuse järgi. Seerumis, kus toimub aglutinatsioon (erütrotsüütide liimimine), on selgelt nähtavad punased terad ja tükid; seerumis, kus aglutinatsiooni ei toimu, jääb veretilk homogeenne, ühtlaselt roosaka värvusega.

Sõltuvalt subjekti veregrupist toimub teatud proovides aglutinatsioon. Kui uuritaval on 0 (I) veregrupp, siis erütrotsüütide liimimist mis tahes seerumiga ei toimu.
Kui uuritaval on A (II) veregrupp, siis ei toimu aglutinatsiooni ainult A (II) rühma seerumiga ja kui subjektil on B (III) rühm, siis ei toimu aglutinatsiooni seerumiga B (III). Aglutinatsiooni täheldatakse kõigi seerumitega, kui analüüsitav veri on AB (IV) rühm.

Rh tegur.


Mõnikord täheldatakse isegi sama rühma vereülekande korral tõsiseid reaktsioone. Uuringud on näidanud, et umbes 15% inimestel puudub veres eriline valk, nn Rh-faktor..

Kui neile inimestele tehakse teine ​​seda faktorit sisaldav vereülekanne, siis tekib tõsine komplikatsioon nimega Rh-konflikt ja tekib šokk. Seetõttu peavad Rh-faktori määrama praegu kõik patsiendid, kuna negatiivse Rh-faktoriga retsipiendile saab üle kanda ainult Rh-negatiivset verd.

Kiirendatud viis Rh-kuuluvuse määramiseks. Klaasilisele Petri tassile kantakse 5 tilka retseesivastast seerumit, mis on sama rühm, mis retsipiendil. Seerumile lisatakse tilk katsealuse verd ja segatakse hoolikalt. Petri tass pannakse veevanni temperatuuril 42–45 ° C. Reaktsiooni tulemusi hinnatakse 10 minuti pärast. Kui tekib vere aglutinatsioon, on subjektil Rh-positiivne veri (Rh +); kui aglutinatsiooni pole, on testitud veri Rh-negatiivne (Rh—).
Rh-faktori määramiseks on välja töötatud veel mitmeid meetodeid, eelkõige universaalse Rh-vastase reagendi D abil.

Kõigi haiglas olevate patsientide veregrupp ja Rh on kohustuslik kindlaks määrata. Uuringu tulemused tuleb kanda patsiendi passi.

Veregrupi algoritmi määramine

Näidustused: vereülekande vajadus, operatsiooniks ettevalmistumine.

Valmistage ette: tavaline süvenditega plaat; klaasvardade komplekt; isotooniline naatriumkloriidi lahus; hemaglutineerivate seerumite 1, 2, 3, 4 kahe seeria rühmade komplekt; pipetid; uuritud veenist või sõrmest võetud veri; kell; kandikud; kindad; jäätmemahutid; desinfitseerivate lahustega anumad.

Ettevalmistused manipuleerimiseks:

  1. Õde on manipuleerimise läbiviimiseks täielikult valmis: ta on riietatud ülikonda (rüü), maski, kinnastesse, korki, vahetatavatesse kingadesse.
  2. Kontrollige standardsete hemaglutineerivate seerumite kvaliteeti järgmiselt: värvimärgistus, välimus (hele, läbipaistev); pakendi ohutus, õigesti kujundatud etiketi olemasolu.
  3. Valmistage ette kõik, mida vajate manipuleerimiseks.

Manipuleerimine:

- kandke valgel plaadil vastavalt tähisele järjestikku üks tilk seeriat 1, 2, 3 kahest seeriast. Langetage iga pipett kohe samasse ampulli (viaali), kust need võeti;

- klaaspulga abil asetage lohkude (6 lohku) kõrvale tilk uuritavat verd. Veretilk peaks olema 10 korda väiksem kui seerumitilk;

- märkige aeg ja segage veri seerumiga 1 g puhta, kuiva klaasvardaga, seejärel 2 g teise vardaga. jne. kõigis süvendites;

- kui aglutinatsioon algab, kuid mitte varem kui 3 minutit, lisage üks tilk isotoonilist naatriumkloriidi lahust tilkadele, milles aglutinatsioonireaktsioon on toimunud, et välistada valeauglutinatsioon, ja jätkake vaatlust 5 minutit.

Tulemuste hindamine:

a) positiivse reaktsiooniga ilmuvad segusse kõige väiksemad silmale nähtavad terad, mis koosnevad liimitud erütrotsüütidest. Väikesed terad sulavad suurteks ja mõnikord helvesteks, samas kui vadak muutub värviks;

b) negatiivse reaktsiooni korral jääb vedelik ühtlaselt roosaks;

c) 4 positiivse ja negatiivse reaktsiooni kombinatsiooni on võimalik:

1. Kui üheski rakus ei toimu aglutinatsiooni, siis I rühma veri (0).

2. Kui aglutinatsioon toimub esimeses ja kolmandas rakus, siis II (A) rühma veri.

3. Kui aglutinatsioon on esimeses ja teises rühmas, siis III (B) rühma veri.

4. Kui aglutinatsioon esimeses, teises, kolmandas rakus, siis IV (AB) rühma veri.

Vigade kõrvaldamiseks kontrollige verd 4. rühma seerumiga, kus aglutinatsioon ei tohiks olla.

Manipuleerimise lõpp:

  1. Eemaldage kindad, asetage need desinfitseerivasse lahusesse.
  2. Peske käsi, kuivatage rätikuga.

Märkus: veregrupi määramine toimub hea valgustusega ruumis temperatuuril 15–25 0 С.

algoritm 7 tsüklonitega veregrupi määramine

Veregrupi määramine anti-A ja B-vastaste tsüklonitega

1 Sissejuhatus: tsüklonitega veregrupi määramine toimub ravitoas arsti ettekirjutuse järgi. Mul on seljas müts, prillid, mask, rüü, põll, kindad. Käed on eelnevalt hügieeniliselt töödeldud.

2 varustus:

Tsoliklones anti-A, anti-B

Uuritav veri (katseklaas)

Vere määramise plaat.

Steriilsed klaasvardad 2 tk (klaasist, Petri tassis)

Isotooniline naatriumkloriidi lahus

Steriilne pipett 1 tk.

Steriilne kapillaar pirniga.

Konteiner 3% kloramiinilahusega.

3 Manipuleerimise tehnika:

Tsikloonid jaotatakse üksikutesse kaevudesse üks suur tilk korraga.

Tsoolikloonide tilkade kõrval sisestage väikesed (0,01 ml) veretilgad koos kapillaariga, vältides kapillaari ja vere kokkupuudet.

Segage tsoliklonid ja veri eraldi pulkadega.

Raputage plaati, jälgige aglutinatsiooni 2,5 minutit.

Pipeteerige aukudesse, kus 1. soolalahuse tilgul on toimunud aglutinatsioon

Vingerda, vaata aglutinatsiooni.

Tsoolikloonide abil veregrupi määramisel...

Üheski süvendis - esimeses rühmas - aglutinatsiooni ei täheldata

Aglutinatsiooni täheldatakse anti-A tsoliclone'iga - teine ​​rühm

Aglutinatsiooni täheldatakse anti-B tsolicloniga - kolmas rühm

Aglutinatsiooni täheldatakse anti-A ja B-vastaste tsüklonitega - neljas rühm

Pärast manipuleerimist leotatakse kõik kasutatud esemed 3% kloramiinilahusega anumas.

4 võimalikud vead:

Tervishoiutöötaja kaitsevarustuse mittekasutamine.

Pulkade taaskasutamine.

Verega kokkupuutuvate pulkade ülekandmine puhaste pulkade salve.

Aglutinatsioonimustri mittevastavus järeldusele rühma kuuluvuse kohta.

Verega kokku puutunud esemeid pole desinfitseeritud.

Mitte prohmakad:

Aglutinatsiooni ooteaeg vähem kui 2,5 min.

Avadesse, kus toimus aglutinatsioon, ei lisatud soolalahust.

Pulga hoidmine otstest, mitte keskelt.

5 Hindamiskriteeriumid:

Pass - pole ühtegi jämedat viga, mitte rohkem kui kaks mitte-viga.

Ei läinud läbi - jämedate vigade olemasolu, rohkem kui kahe mitte-vea olemasolu.

Kui tehakse mõni ränk viga, võib õpetaja paluda teil korrata manipuleerimise vastavat etappi. Kui viga kordub, ei läinud see üle. Lubatud on ainult üks kordus.

Veregrupi määramine

1901. aastal avastas silmapaistev teadlane Karl Landsteiner veregrupid ja pani aluse kaasaegsele transfusioloogiale. Teadlane tegi kindlaks kolm rühma, mis põhinesid erütrotsüütide ja vereseerumi aglutinatsioonireaktsiooni erinevatel variantidel. Uuringu materjal võeti meie enda labori töötajatelt. Landsteineri õpilased Decastello ja Sturley avastasid mõni aasta hiljem neljanda rühma, kuid pidasid seda kahtlaseks ja jäid uurimistulemustest välja. 1906. aastal kinnitas Praha psühhiaater Jan Janski AB (IV) rühma olemasolu. Uuringu avaldamine kohalikus väljaandes jäi peaaegu märkamatuks. 1910. aastal, pärast Mossi taasavastamist neljandas rühmas, oli Jan Jansky sunnitud avastuse paremust tõestama. Tšehhi teadlane tegi ettepaneku veregruppide digitaalseks määramiseks: I, II, III, IV.

Transfusioonmeditsiinis on veregrupid erütrotsüütide antigeenide erinevad kombinatsioonid. Antigeenid on geneetilised omadused: need on päritud vanematelt ja jäävad muutumatuks kogu elu. 1980. aastal töötas rahvusvaheline vereülekandekogukond punaste vereliblede antigeenide jaoks välja arvulise terminoloogia. Määrati 23 veregrupisüsteemi, sealhulgas 194 antigeeni. Numeratsioon vastab enamikul juhtudel tuvastamise järjekorrale. Igas 23 süsteemis sisalduvad antigeenid on kodeeritud kuuekohalise numbriga: esimesed kolm numbrit on süsteemi number, ülejäänud kolm näitavad antigeeni spetsiifilisust süsteemis.

Süsteem nr.NimiMääramineGeenide nimetusKromosoomide lokaliseerimine
001AB0AB0AB09q34.1-q34.2
002MNSMNSGYPA, GYPB, GYPE4q28-q31
003PP1P122q11,2-qter
004RhRHRHD, RHCE1p36.2-p34
005LuterlaneLULU19q12-q13
006KellKELKEL7q33
007LewisLEFUT319p33
008DuffyFYFY1q22-q23
009KiddJKJK18q11-q12
010DiegoDIAE117q12-q21
011YtYTACHE7q22
012XgXGXGXp22.32
013SciannaSCSC1p36.2-p22
014DombrockTEETEEteadmata
015ColtonCOAQP17p14
016Landsteiner-WienerLWLW19p13,2-cen
017Chido / RogersCH / RGC4A, C4B6p21.3
018HhHFUT119q13
019KxXKXKXp21.1
020GerbichGEGYPC2q14-q21
021CromerCROMDAF1q32
022NööbidKNCR11q32
023IndiaanlaneINCD4411p13

AB0 veregruppide süsteem

Grupi kuuluvus vastavalt süsteemile AB0

AglutinogeenidAglutiniinid
0α ja β
Aβ
Bα
ABei
  • 0 (I): antigeenid A ja B puuduvad, avastatakse antikehad α ja β (35–40% maailma elanikkonnast);
  • A (II): on olemas antigeen A ja antikehad P (35%);
  • B (III): Leiti aglutinogeen B ja aglutiniin a (15 - 20%);
  • AB (IV): aglutinogeenide A ja B olemasolu, aglutiniinide α ja β puudumine (5–10%).

Kui liikume Euraasiast läänest itta, väheneb antigeeni A avastamise määr ja antigeeni B suurenemine. Antigeen 0 on Aasias haruldane, kuid on levinud Lõuna-Ameerika, Polüneesia ja Austraalia põlisrahvaste seas. Põhjuseks nakkushaiguste epideemiad.

Vereanalüüsi tulemus registreeritakse haigusloos või doonorikaardil. Ülekandearst näitab kuupäeva ja märgid.

Mõnel juhul täheldatakse tüpiseerimise ajal erütrotsüütide kerget aglutinatsiooni. Ebapiisavalt väljendunud reaktsiooni seletatakse antigeenide A ja B nõrkade variantide olemasoluga. Suurimat kliinilist olulisust esindavad A-alagrupid1 ja A2. Nõrgad variandid avastasid esmakordselt 1911. aastal teadlased Dungern ja Hirszeld. Hiljem, 1930, pakkusid Landsteiner ja Levine välja alarühmade nimed - A1 ja A2. A2 esineb A rühmas kuni 20% ja AB rühmas kuni 35%. Vereproovide näoseerum2 võib sisaldada anti-A-d1-antikehad: 2% juhtudest A rühmas2 ja 30% A-s2B. Anti-A antikehad1 on ohtlikud A-rühma erütrotsüütide aglutinatsiooni tõttu.

A-veregruppide määramise meetod2 ja A2B

Erütrotsüütide avastamise määr A2 varieerub oluliselt sõltuvalt kasutatud reagentidest. Siin on uurimistulemuste võrdlus, kui kasutatakse A-veregruppide määramiseks erinevaid meetodeid2 ja A2B.

  • Anti-A1 (lektiin, fütohemaglutiniin). Diagnosticum aglutineerib selgelt (+++ / ++++)1 erütrotsüüdid kohe pärast prooviga segamist. Ei aglutineeri A-d2 või põhjustab väikest aglutinatsiooni viiendal minutil või hiljem.
  • Tavalised isohemaglutineerivad seerumid.
  • Anti- ja AB-vastased tsüklonid.
  • Tsoliklon anti-A nõrk.
Analüüsitud proovidA (II) veregruppAB veregrupp (IV)
Analüüsitud proovidA-rühm2 (II) protsentidesAnalüüsitud proovidA-rühm2B (IV)%
Anti-A1 (lektiin, fütohemaglutiniin)159214.735723.5
Tsüklonid: anti-A, anti-AB35992,1 *3577,03 *
Tsoliklon anti-A - nõrk35874,5 *35711,2 *
Tavalised isohemaglutineerivad seerumid159217.434434.2

Märkus: * - aglutinatsioon on nõrk, roosal taustal on väikesi aglutinate.

Suurima uurimistäpsuse tagab Anti-A1 (lektiin, fütohemaglutiniin). Test on soovitatav antigeeni A alarühmade tuvastamiseks alla kaheaastastel lastel. Põhjuseks on vastsündinute erütrotsüütide füsioloogiline ebaküpsus, mis toob kaasa standardse isohemaglutineeriva seerumi uuringu ekslikud tulemused.

1930. aastal avastasid Landsteiner ja Levine alatüübi Aint: vahepealne variant A vahel1 ja A2. See antigeen on neegriididele iseloomulik ja jõuab A-veregrupiga inimestel 8,5% -ni. Kaukaaslastel täheldati Aint ainult 1% -l teistest veregruppidest. Äärmiselt harvadel juhtudel puuduvad inimesel kõik AB0 süsteemi antigeenid. Bombay fenotüüp on tingitud hh genotüübist. H-antigeeni puudumisel leitakse selle kategooria isikutel anti-A ja B-vastaseid antikehi.

Veregruppide määramise meetod

Hemaglutineerivate seerumitega veregrupi määramise algoritm

AB0 veregrupi otsesel meetodil määramiseks kasutatakse kahte standardset isohemaglutineerivat seerumit. Valmistage kaks seerumipartiid kolmest rühmast tiitriga 1:32 või rohkem. Iga seerumi joonistamiseks kasutage eraldi märgistatud pipetti. Valmistage kontrolliks ette AB (IV) seerum.

  1. Tagage hea valgustus ja õhutemperatuur 18–25 ° C.
  2. Märkige tahvel: 0 (I) - vasak, A (II) - keskosa, B (III) - parem. Keskel ülaosas märkige doonori nimi või analüüsitava vere number.
  3. Kandke süvenditesse 1-2 tilka (umbes 0,1 ml) seerumit kahes reas vastavalt plaadi märgistusele.
  4. Pange pipeti või klaaspulga abil üks väike tilk uuritavaid erütrotsüüte seerumitilkade kõrvale. Seerumi maht peaks olema umbes 10 korda suurem erütrotsüüte sisaldava vedeliku mahust.
  5. Segage tilgad pulgaga süvenditesse.
  6. Reaktsiooni kiirendamiseks raputage tabletti kergelt.
  7. Kolme minuti pärast lisage üks tilk NaCl plaadi süvenditesse, milles on alustatud aglutinatsiooni. Oodake veel kaks minutit.
  8. Viie minuti pärast hinnake reaktsiooni tulemusi mööduvas komplektis. Kerge aglutinatsiooni korral lisage veel üks tilk NaCl.
  • Negatiivne reaktsioon kolmes süvendis näitab antigeenide puudumist uuritava proovi erütrotsüütides. Veri kuulub rühma 0 (I).
  • Aglutineerumine süvenditesse seerumiga 0 (I) ja B (III) näitab aglutinogeeni A olemasolu ja A (II) rühma kuulumist.
  • Seerumite 0 (I) ja A (II) reaktsioonide algus näitab antigeeni B ja rühma B (III) olemasolu.
  • Reaktsiooni tulemused näitavad, et kõik süvendid näitavad aglutinogeenide A ja B olemasolu ning vastavad neljandale rühmale AB (IV).

Viimasel juhul peaksite veenduma, et mittespetsiifilist reaktsiooni ei esine: tilgake plaadile 2-3 tilka vastavat seerumirühma AB (IV) ja lisage üks tilk analüüsitavaid erütrotsüüte. Segage vedelikke ja hinnake tulemust viie minuti pärast. Aglutinatsiooni puudumine näitab kuulumist AB (IV) rühma, esinemine on märk mittespetsiifilisest reaktsioonist. Sellisel juhul, nagu ka kerge aglutinatsiooni korral, korrake uuringut teiste seerumiseeriatega.

Tsüklonitega veregrupi määramise tehnika

Erütrotsüütide antigeenide vastased monoklonaalsed antikehad on asendanud isohemaglutineeruvad seerumid. Iga tüpiseerimise jaoks piisab ühest partiist anti-A, anti-B, anti-AB reaktiive. Monoklonaalsete reagentide kasutuselevõtt on vererühma AB0 määramise meetodit oluliselt lihtsustanud ja standardiseerinud. Siin on kiire samm-sammuline juhend tahvelarvutiga uuringute tegemiseks.

  1. Tagage hea valgustus. Töö toatemperatuuril.
  2. Uuringu objektiks on erütrotsüüte sisaldavad söötmed.
  3. Märgistage plaatide süvendid: anti-A, anti-B, anti-AB või kasutage sildiga kleebisega plaati.
  4. Mõlemasse märgistatud süvendisse tilgutatakse umbes 0,1 ml sobivat monoklonaalset reagenti.
  5. Iga diagnostilise tilga kõrvale lisage umbes 0,03 ml analüüsitud erütrotsüüte.
  6. Segage reaktiiv süvendites olevate erütrotsüütidega eraldi üksikute klaasvardadega.
  7. Loksutage tabletti umbes kolm minutit.
  8. Kontrollige kaevudes aglutinatsiooni.

Tavaliselt tuvastatakse reaktsioon juba esimestel sekunditel pärast segamist. Samal ajal võivad antigeenide A ja B nõrgad variandid anda hilisema aglutinatsiooni.

Veregrupi määramine kaudse meetodi abil: tegevuste algoritm

Veregrupi määramise meetod põhineb 0, A, B rühma eelnevalt tüpiseeritud isendite erütrotsüütide või mitme üherühma doonori erütrotsüütide segul isohemaglutiniinidega α ja β uuritud seerumis..

Kasutage iga tüpiseerimisreagendiga kuiva, puhast pipetti. Loputage segamispulgad ja pipetid 0,9% NaCl lahuses.

  • Valmistage plaat või plaat ette. Tagage hea ruumi valgustus.
  • Koguge katseklaasi 3–5 ml ilma stabilisaatorita verd. Lase vadakul toatemperatuuril 1,5–2 tundi istuda.
  • Peske erütrotsüüdid 0,9% soolalahuses. Valmistage 5% läga.
  • Märgistage tabletil jaotised: 0 (I), A (II), B (III).
  • Mõlemasse süvendisse tilgutatakse 2 tilka (umbes 0,1 ml) analüüsitud plasmat.
  • Lisage igasse süvendisse umbes 0,03 ml uuritavaid punaseid vereliblesid.
  • Segage eraldi pulgade abil tüüpilised punased verelibled seerumiga.
  • Loksutage tabletti 5 minutit ettevaatlikult.
  • Tehke visuaalne hinnang aglutinatsiooni testi tulemustele läbilaskvas valguses.

Järeldus grupi kuuluvuse kohta

Plasma tulemused standardsete erütrotsüütidegaGrupi kuuluvus
0 (I)A (II)B (III)
-++0 (I)
--+A (II)
-+-B (III)
---AB (IV)

+ - aglutinatsiooni olemasolu, - - reaktsiooni negatiivne tulemus.

  • 0 (I): reaktsioon süvendites A (II), B (III) (tuvastatud a ja β antikehad).
  • A (II): aglutinatsioon erütrotsüütidega B (III) (tuvastatud β aglutiniinid).
  • B (III): aglutinatsioon augus A (II) (määratud a-aglutiniinid).
  • AB (IV): kõikides süvendites ei ilmne reaktsiooni (plasmas ei tuvastatud antikehi).

Reesusüsteem

Levine ja Stetson avastasid reesusantigeenid 1939. aastal. Teadlased uurisid sünnitusjärgsete naiste hemolüütiliste reaktsioonide tekkimise põhjuseid vereülekannete ajal AB0, MN ja P. süsteemides identsete abikaasa erütrotsüütidega naistele. Aasta hiljem tootsid Landsteiner ja Wiener antikehi, immuniseerides küülikud reesusahvide erütrotsüütidega. Antikehi nimetatakse anti-RH antikehadeks. Saadud aglutiniinid reageerisid reesusahvide erütrotsüütide ja 85% valge rassist pärit New Yorkeri elanike aglutinatsioonireaktsiooniga. Antikehade teket põhjustanud antigeeni nimetatakse RH-faktoriks (D-faktoriks).

Harvadel juhtudel ei sisalda inimese punased verelibled Rh-antigeeni. Fenotüüp on tähistatud Rh-ganull. Geen Xro sel juhul on see homosügootsel kujul ja pärsib kõigi antigeenide tootmist. Rh fenotüüpnull ei näita aglutinogeenset aktiivsust, kuid neil on võime antigeene pärimise teel edasi anda.

Eurooplaste seas on Rh-positiivsete sagedus D-antigeeniga isikutel 85%. Punaste vereliblede membraan sisaldab tavaliselt umbes 10 000 - 30 000 D molekuli. D-positiivseid isikuid on kahte eritüüpi: D u (nõrk) ja D osaline (osaline). Immuunsüsteem D u ja D osaline on võimeline tootma anti-D antikehi.

Nõrka antigeeni leidub 1,5% Rh-positiivsetel inimestel ja seda iseloomustab väike arv (100-500) membraani D-molekule. See on immunogeenne Rh-negatiivsete isikute jaoks. Sel juhul võib D-positiivsete erütrotsüütide ülekandmine nõrga D-ga patsientidele põhjustada doonori vererakkude sensibiliseerimist. D u-ga erütrotsüüdid on nõrgalt aglutineeritud või ei alga üldse otsese aglutinatsioonireaktsiooni täielike Rh-vastaste antikehadega. Rh-kuuluvuse määramine toimub kaudse antiglobuliinitestiga. Kandjaid D u peetakse Rh-positiivseteks doonoriteks ja Rh-negatiivseteks retsipiendideks.

Osalisel D-l on valgu molekuli ühes või mitmes epitoopis puudus. D-osaliste inimeste immuunsüsteem on võimeline tootma antikehi puuduvate epitoopide vastu. Osalise antigeeni kandjate seas eristatakse seitset inimrühma. Suurim kliiniline tähtsus on D VI kandmine (esineb ainult epitoop Z): selle kategooria omanikud toodavad antikehi muutumatu antigeeni ja osaliste antigeenide D I - D V, D VII suhtes. Rh-faktori D VI määramise tehnika seisneb kahe diagnostika järjestikuses kasutamises: monoklonaalsed IgM anti-D-antikehad (tsoliklone Anti-D-Super või Anti-D IgM) ja polüklonaalsed või monoklonaalsed IgG anti-D antikehad (standardne universaalne reaktiiv või tsoliklon Anti -D). Reaktsiooni negatiivne tulemus uuringu esimesel ja positiivne tulemus näitavad uuringu D VI tuvastamist. Tavaliselt vastab D VI kategooria genotüübile CcDee. D VI-ga rasedatele naistele, kes kannavad täis D-d, on ette nähtud reesusevastane immunoglobuliin.

Reesusantigeenide vastased antikehad on immuunsed. Tekib isosensitisatsiooni tõttu. Spetsiifilisuse määravad antigeenid, mis provotseerivad antikehade moodustumist. Eraldage täielikud ja mittetäielikud antikehad.

Täielikud on IgM antikehad. Neil on kõrge molekulmass ja neid leidub harvemini kui mittetäielikke antikehi. Võimeline aglutineerima Rh-positiivseid erütrotsüüte. On vereülekannete jaoks vähem olulised.

Mittetäielik kuulub valdavalt IgG klassi. Need on kinnitatud Rh-positiivsete erütrotsüütide pinnale ilma aglutinaatide moodustumiseta. Vererakkude sidumine toimub kolloidlahuste ja proteolüütiliste ensüümide juuresolekul või pärast töötlemist antiglobuliinseerumiga. Nende molekulmass on madalam võrreldes täielike antikehadega. Võimalik platsenta ületada. Sensibiliseerimise käigus tekivad kõigepealt täielikud antikehad, seejärel suuremal määral mittetäielikud (IgG immunoglobuliinid) antikehad.

Rh-faktori määramise tehnika anti-D-Super tsolikloni abil

Tsoliklon Anti-D-Super on täielik inimese anti-D IgM antikeha. Usaldusväärsete tulemuste saamiseks peab analüüsitav proov sisaldama piisavas koguses punaseid vereliblesid..

  1. Tagage ruumis hea valgustus ja toatemperatuur.
  2. Pange plaadile üks suur tilk (umbes 0,1 ml) Anti-D IgM-i.
  3. Pange lähedale üks väike tilk (umbes 0,03 ml) uuritavaid punaseid vereliblesid.
  4. Segage kaks tilka steriilse pulgaga.
  5. 10–15 sekundi pärast raputage plaati ettevaatlikult 20–30 sekundit.
  6. Kontrollige aglutinatsiooni kolm minutit pärast segamist.

Reaktsiooni korral hinnatakse verd Rh-positiivseks (Rh +), reaktsiooni puudumisel Rh-negatiivseks (Rh-). Negatiivse või nõrga aglutinatsiooni korral on vaja uuring läbi viia mittetäielike anti-D IgG antikehadega, et tuvastada nõrk või osaline antigeen D.

Rh-teguri D u määramise meetod katseklaasis

Paralleelselt analüüsiga viidi läbi kolm kontrollproovi: anti-D (anti-D IgG) tsoliklooni reaktiiv standardsete Rh-positiivsete ja Rh-negatiivsete erütrotsüütidega, analüüsitud erütrotsüüdid želatiinilahusega ilma anti-D IgG diagnosticumita.

  1. Pange katseklaasi 0,05 - 0,1 ml (üks tilk) hüübinud verehüübist või konservandist pestud erütrotsüüte.
  2. Lisage 0,1 ml (kaks tilka) 10-50% želatiini, mis on soojendatud vedelaks temperatuuril 45-50 ° C.
  3. Lisage üks tilk Anti-D (anti-D IgG) tsolicloni.
  4. Sega.
  5. Inkubeerige toru veevannis 10–15 minutit või inkubaatoris 48 ° C juures pool tundi.
  6. Lisage 5–6 ml isotoonilist lahust.
  7. Pöörake toru 1 - 2 korda ümber.
  8. Hinnake aglutinatsiooni olemasolu läbilaskvas valguses.

Anti-D IgM-ga reageerimise tulemuste puudumine ja väljendunud aglutinatsioon anti-D IgG-ga viitab antigeeni D nõrkade vormide avastamisele. Nõrga aglutinatsiooni korral tuleb uuringut korrata kaudses Coombsi testis.

Rh-seose määramine tavalise universaalse reagendiga

Standardreaktiiv antiresus Rh0D sisaldab polüklonaalseid mittetäielikke anti-D antikehi. Paralleelselt proovi analüüsiga viiakse läbi Rh-reaktiivi kontrolluuring0D standardsete Rh-positiivsete (ühe rühma või rühma 0) ja Rh-negatiivsete (ühe rühma) erütrotsüütidega.

  1. Pange üks tilk Rh diagnosticum toru põhja0D.
  2. Lisage üks tilk analüüsitud punaseid vereliblesid.
  3. Loksutage tuubi mitu korda.
  4. Kallutage toru peaaegu horisontaalseks ja pöörake aeglaselt vähemalt 3 minutit. Sisu levitamine mööda seinu annab selgema reaktsioonitulemuse. Tavaliselt toimub aglutinatsioon esimese 60 sekundi jooksul. Nõrga antigeeni D u tuvastamiseks on vaja aega.
  5. Lisage 2–3 ml isotoonilist NaCl lahust ja pöörake katseklaas 2–3 korda raputamata ümber.
  6. Hinnake visuaalselt aglutinatsiooni olemasolu. Selge lahuse taustal väljendunud helbed näitavad antigeeni D olemasolu. Ühtlaselt värvunud vedelik näitab antigeeni puudumist.

Tulemust peetakse usaldusväärseks alles pärast kontrollproovide kontrollimist: reaktsiooni algus tavapärase Rh-positiivsega ja reaktsiooni puudumine - Rh-negatiivsete erütrotsüütidega.

Lisateavet kaudse Coombsi testi järkjärgulise koostamise kohta, kasutades mittetäielikke anti-D-antikehi, leiate veebisaidi jaotisest "Coombsi reaktsioon".

Lisateavet Diabeet